Тесты для идентификации культуры.
Морфология возбудителя.
Грам - . «Стая рыб». Подвижны. Монотрихи.
Рост на питательных средах.
1% пептонная вода – голубая пленка.
Щелочной агар – среднии колонии голубоватого цвета.
Среда TBRS – колонии желтого цвета.
Изучение антигенных свойств.
Сахаролитические свойства.
Лактоза, арабиноза, дульцит –
Глюкоза, сахароза, манит, манноза, мальтоза → к
Протеолитические свойства.
Разложение желатина, пептонизация молока +
Разложение мочевины (V. cholerae +, V. eltor - )
Проба на оксидазу.
Оксидаза +
Чувствительность к фагам.
Ускоренные методы
Реакция иммобилизации.
На предметное стекло наносят 2 капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды. К 1-ой капле добавляют одну каплю О-сыворотки (1:100), ко 2-ой – каплю физ раствора. Каждую каплю эмульгируют пастеровской петлей или пипеткой, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. При положительном результате в первой капле прекращается движение вибрионов, во второй наблюдается движение.
Люминисцентно-серологический метод.
Тесты для идентификации культуры.
Морфология возбудителя.
Грам - . Капсула. Полиморфны. Биполярность (окраска метиленовым синим).
Рост на питательных средах.
МПА – через 48 часов «кружевной платочек».
МПБ – «сталактитовый рост»
Скошенный агар – вязкий серый налет
Изучение антигенных свойств.
Сахаролитические свойства.
Мальтоза, арабиноза, глюкоза (не всегда), маннит → к
Сахароза, рамноза -
Протеолитические свойства.
Разложение желатина, свертывание молока - . H2
S +
Биологическая проба.
Чувствительность к фагам.
Дифференциация возбудителей чумы
от возбудителя псевдотуберкулеза.
| Признаки
|
Возбудитель чумы
|
Возбудитель псевдотуберкулеза
|
Подвижность Рост на голодной среде Чумной бактериофаг Расщепление рамнозы Образование мочевины Свертывание молока Лакмусовое молоко Фибринолитические св-ва Патогенность для животных |
Неподвижен Не растет Лизируется - - - Медленное ощелачивание Обладает Убивает морских свинок и крыс |
Подвижен Растет Не лизируется + + + Быстрое ощелачивание Не обладает Морских свинок убивает, крыс не убивает |
Тесты для идентификации культуры.
Морфология возбудителя.
Грам - . Не подвижны. Окраска по Романовскому – нежно-фиолетовые
Аллергическая проба.
Пробу ставят на 3– 5день заболевания.
а) накожный метод
: тулярин (1 мл – 10 млрд. убитых микробных клеток). Пр
б) внутрикожный метод:
взвесь убитых бактерий (1 мл – 500 млн. микробных клеток). Пробу ставят на ладонной поверхности предплечья. Положительная реакция – отечность и гипермия через 24 – 48 часов.
Серологическая диагностика.
Линейная реакция агглютинации
: 2 – 3 мл крови из локтевой вены берут в пробирку. Полученную сыворотку разводят 1:50 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше. Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая формалином взвесь бактерий (1 мл – 25 млрд. микробных тел).
РНГА
: сыворотку разводят от 1:100 до 1:10000. Антиген – туляремийный эритроцитарный диагностикум. Диагностическим титром считают титр 1:100 и выше.
Биологическая проба.
Люминисцентно-микроскопический метод.
Тесты для идентификации культуры.
Морфология возбудителя.
Грам - . Не подвижны. Капсула. В мазке располагаются беспорядочно.
Бактериологический метод.
Производят посев крови во флаконы, в которые наливают по 30 – 50 мл агара. В каждый флакон заливают по 25 – 30 мл простерилизованного бульона. Эту среду выдерживают в термостате 2 – 3 дня, после чего добавляют по 5 мл в каждый флакон. При положительном результате на поверхности появляются колонии – мелкие, бесцветные, выпуклые с зернистостью.
Серологическая диагностика.
Реакция Райта.
Берут 1 – 2 мл крови из пальца. Получают сыворотку. Разводят 1:25 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше (при титре 1:400 – реакция резко положительная). Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая культура бруцелл.
Аллергическая проба.
Внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят 0,1 мл бруцеллина. Результат реакции учитывают через 24 – 48 часов. Положительная ракция характеризуется отеком и гиперемией размером 4r6 см.
Биологическая проба.
Метод иммунофлюоресценции.
Тесты для идентификации культуры.
Морфология возбудителя.
Грам + . Не подвижны. Капсула. Спора.
Рост на питательных средах.
МПА – «голова медузы» или «львиная грива»
МПБ – придонный рост в виде «комка ваты»
Желатин – «перевернутая елочка»
Изучение антигенных свойств.
Сахаролитические свойства.
Глюкоза, лактоза, мальтоза, левулеза → к
Протеолитические свойства.
Разложение желатина, пептонизация молока +
Медленное свертывание молока. H2
S + . NH3
+ .
Гемолитические свойства.
Не вызывает гемолиз, в отличии от антракоида.
Чувствительность к фагам.
Биологическая проба.
«Жемчужное ожерелье»:
К бульону Хоттингера прибавляют 30% инактивированной сыворотки и пенициллин из расчета 0,5 ЕД на 1 мл бульона. 3 часа в термостате. Делают мазок. Фиксируют жидкостью Карнуа (этиловый спирт, хлороформ и ледяная уксусная кислота). Окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. Результат действия пенициллина – цепи шаров, на поминающих «жемчужное ожерелье».
10.
Аллергическая проба.
Внутрикожно на внутренней поверхности предплечья вводят антраксин. Реакцию учитывают через 24 – 48 часов. Положительная реакция проявляется с первых дне заболевания.
Реакция Асколи.
Приготовление антигена: исследуемый материал измельчают, заливают 25 – 50 кратным объемом физ раствора и кипятят. Полученный экстракт фильтруют. Для реакции используют преципитирующую сибиреязвенную сыворотку и для контроля сибиреязвенный антиген.
Постановка реакции:
1-ая пробирка – преципитирующая сыворотка + исследуемый термоэкстракт;
2-ая пробрка – преципитирующая сыворотка + стандартный сибереязвенный антиген (контроль);
3-я пробирка – преципитирующая сыворотка + термоэкстракт из шерсти здорового живтного (контроль).
При положителной реакции первых 2 пробирках образуется преципитационное кольцо, а в 3 – кольцо отсутствует.