КУРСОВАЯ РАБОТА
по фармацевтической химии
тема:
«Методы анализа лекарственных средств производных арилалкиламинов»
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ... 3
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.. 5
Глава 1. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ АРИЛАЛКИЛАМИНОВ 5
1.1. ФАРМАКОЛОГИЯ АДРЕНАЛИНА.. 5
1.2. ФАРМАКОЛОГИЯ НОРАДРЕНАЛИНА. 11
1.3. ФАРМАКОЛОГИЯ ЭФЕДРИНА.. 15
Глава 2. МЕТОДЫ АНАЛИЗА.. 18
2.1. ПЛОСКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ.. 18
2.2. ИК и УФ спекторофотометрия. 21
2.3. ЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ.. 23
2.4. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.. 27
Глава 3. ФАРМАКОПЕЙНЫЕ ПРЕПАРАТЫ... 29
3.1. Solutio Adrenalini hydrochloride 0,1%... 29
3.2. Noradrenalini hydrotartas. Норадреналина гидротартрат. 30
3.3. Solutio Noradrenolini hydrotartratis 0,2% pro injektionibus. Раствор норадреналина гидротартрата 0,2% для инъекций.. 31
3.4. Ephedrine hydrochloridum Эфедрина гидрохлорид.. 32
3.5. Solutio Eppedrini hydrochloridi 5% pro injektionibus Раствор эфедрина гидрохлорида 5% для инъекций 33
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ... 35
Глава 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ. 35
1.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА.. 35
1.2. АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА.. 37
1.3. АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА.. 38
Глава 2. КОЛИЧЕСТВЕНЫЙ АНАЛИЗ. 39
2.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА.. 39
2.2. АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА.. 39
2.3. АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА.. 39
ВЫВОДЫ: 41
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ... 42
ВВЕДЕНИЕ
Лекарственное средство может иметь три основных названия:
1. Химическое название
, отражающее состав и структуру лекарственного вещества. Химическое название редко употребляется в практическом здравоохранении, но часто приводима в аннотациях на лекарственные препараты и содержатся в социальных справочных изданиях.
2. Международное непатентованное название
(МНН, International Nonproprietary Name, INN). Это название лекарственного вещества, рекомендованное Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ), принятое для использования во всем мире в учебной и научной литературе с целью удобства идентификации препарата по принадлежности к определенной фармакологической группе и для того, чтобы избежать предвзятости и ошибок. Синонимом МНН является термин генерическое, или дисенерическое название. Иногда МНН отражает химическое строение лекарственного вещества, например: ацетилсалициловая кислота.
3. Патентованное коммерческое название
(Brand name). Оно присваивается фармацевтическими фирмами, производящими данный конкретный оригинальный лекарственный препарат и является их коммерческой собственностью (торговой маркой), охраняемой патентом. Например, торговое название ацетилсалициловой кислоты – аспирин, фурасемида – лазикс, диклофенана – вольтарен. Торговые названия используются фирмами – производителями для маркетинговых целей, для продвижения и конкуренции лекарственных препаратов на рынке.
Когда у фирмы разработчика заканчивается срок действия патента, то другие компании могут производить данное лекарственное средство и продавать его под международным названием. Такие препараты называют воспроизведенными лекарственными средствами, или дигенерическими препаратами. Препараты дисенерики обычно дешевле оригинальных, так как затраты на их разработку и клинические испытания не включены в цену.
Одно и то же лекарственное вещество может содержатся в одинаковых дозах в препаратах одной лекарственной формы имеющих разные торговые названия (препараты синонимы). Поэтому провизор может предложить пациенту заменить один препарат (при отсутствии его в аптеке), другим препаратом – синонимом.
Целью данной работы является:
1. Изучить наиболее широко используемые методы анализа лекарственных средств ариалкиламинов.
2. Определить доброкачественность и эффективность исследуемых препаратов.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
Глава 1. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ АРИЛАЛКИЛАМИНОВ
1.1. ФАРМАКОЛОГИЯ АДРЕНАЛИНА
Адреналин – один из наиболее мощных гипертензивных агентов. Как правило, при применении этого препарата систолическое давление возрастает в гораздо большей степени, чем диастолическое. Вслед за повышением артериальное давление становится ниже исходного уровня, а затем возвращается к нормальным показателям. Тахифилаксия к адреналину не развивается. Действие препарата на ССС определяется по существу алгебраической суммой эффектов, возникающих в результате воздействия препарата на a- и β-адренарецепторы. В механизме гипертензивного действия адреналина существенную роль играет повышение силы сердечных сокращений и увеличение их числа. Эти эффекты связывают с воздействием β-адренорецепторов сердца. При действии адреналина на сердечно-сосудистую систему решающее значение имеет сокращение артериол многих сосудистых областей, особенно кожи, слизистых и органов брюшной полости. Брадикардия, возникающая в экспериментах на животных, предупреждается перерезкой блуждающих нервов или введением атропина. Следовательно, урежение пульса имеет рефлекторную природу и связано с компенсаторным повышением тонуса вагуса в ответ на подъем артериального давления. В малых дозах в опытах на животных адреналин снимает артериальное давление, что объясняют большей чувствительностью к нему β-адренорецепторов. Плотность последних велика в мышечных сосудах и сосудах печени. В клинике при введении адреналина под кожу всасывание его происходит очень медленно вследствие спазма на месте инъекции сосудов подкожной клетчатки. В этом случае систолическое давление умеренно возрастает, но диасталическое обычно понижается. Общее периферическое сопротивление сосудов уменьшается, что объясняют возбуждением β-адренорецепторов сосудов скелетных мышц. В связи с тем, что при клиническом применении адреналина артериальное давление возрастает не столь сильно, компенсаторные рефлексы, реализующиеся через блуждающий нерв, не предупреждают прямое действие препарата на сердце. Число сердечных сокращений, ударный и минутный объем сердца, а также работа левого желудочка существенно возрастают. Этому способствуют также и увеличение венозного возврата к сердцу. Учащение сердцебиений, наблюдаемое при применении адреналина, объясняют прямым действием препарата на сино-аурикулярный узел. Увеличение минутного объема кровообращения не является простым результатом тахикардии, так как кроме этого препарат значительно повышает силу сердечных сокращений. Такие данные были получены в экспериментах на собаках, а также в наблюдениях на людях. При применении адреналина давление в правом предсердии повышается. Увеличивается также венозное давление. Следует подчеркнуть, что в этом случае возрастает давление в легочных сосудах. В повышении давления в малом круге кровообращения значительную роль играет перераспределение крови в легочной циркуляции. Передозировка адреналина может сопровождаться гибелью больного вследствие развития отека легких. Механизм последнего достаточно ложен, однако большую роль в его генезе играет резкое повышение фильтрационного давления в капиллярах легких.
Как известно, адреналин в зависимости от дозы, состояния и локализации сосудов может вызвать их расширение или сужение. Однако в целостном организме в сумме преобладают сосудорасширяющие эффекты над сосудосуживающими и подъем систолического давления в основном обусловлен усилением работы сердца. В связи с этим периферическое сопротивление и диасталическое давление или не претерпевают изменений, или слегка возрастают. Действие адреналина на сосуды проявляется главным образом по отношению к мелким артериалам и прекапиллярным сфинктерам, хотя препарат в определенной степени влияет и на вены, и на крупные артерии. Веноконстрикторное действие показано в наблюдениях на людях с нормальным давлением и в условиях гипотензии. Сосуды различных областей неодинаково реагируют на адреналин. Сосуды кожи, слизистых и почек суживаются, в то время как сосуды скелетных мышц расширяются. При проведении исследований в клинике было показано, что под влиянием препарата кровоток в сосудах скелетных мышц усиливается, а в сосудах кожи и слизистых оболочках уменьшается. Кроме того, снижается также и почечный кровоток, церебральный, коронарный и печеночный – возрастают.
Адреналин оказывает весьма выраженное влияние на тонус терминальных сосудов. Многими исследователями в области микроциркуляции было доказано, что чувствительность микрососудов к адреналину обратно пропорциональна их диаметру и меняется в следующем порядке: прекапиллярные сфинктеры > метартериолы > прекапиллярные артериолы > посткапиллярные венулы.
В 1960 году было установлено, что адреналин введенный внутривенно в дозе 10 – 30 мкг/кг веса, вызывал выраженное тотальное сокращение прекапиллярных сосудов брыжейки крыс, уменьшая скорость кровотока и вызывал стаз крови в венулах, хотя диаметр последних не изменялся.
На резкое повышение тонуса мелких артерий, артериол и метаартериол с замедлением кровотока в сосудах аппендикса крыс при введении адреналина указывала ученая Н.И. Храброва. Эти явления наблюдались ею как в обычных условиях, так и в различные периоды травматического шока.
Если мнения отдельных исследователей о влиянии адреналина на микрососуды аппендикса сходятся, то обратное отличается в отношении действия препарата на терминальные сосуды мягкой мозговой оболочки. Так, одни придерживались мнения, что введение адреналина не вызывает изменения просвета пиальных сосудов. Другие отмечали кратковременное сужение артериол с последующим их расширением после нанесения раствора адреналина. Большинство же авторов указывают, что аппликация адреналина сопровождается уменьшением просвета артерий диаметром более 100 мк, причем эти изменения диаметра сосудов мягкой мозговой оболочки не превышают 4 – 8% исходной величины.
Необходимо подчеркнуть, что чувствительность терминальных сосудов к вазоактивным веществам, в том числе к адреналину, существенно меняется в процессе развития травматического шока.
В силу перечисленных свойств адреналин, как правило, почти не используется в клинике в качестве прессорного агента для терапии острых гипотензий, однако он назначается с целью повышения артериального давления, когда последнее снижается в результате остановки сердца. В ряде случаев в таких ситуациях с помощью адреналина удается достичь положительных эффектов.
В экспериментах на собаках было показано, что адреналин значительно увеличивает выживаемость животных после гипоксической остановки сердца.
Адреналин оказывает значительное влияние на метаболические процессы, в частности на кислородный режим организма, углеводный, жировой и другие виды обмена веществ. Данные о влиянии адреномиметиков на тканевое дыхание довольно противоречивы. Некоторые исследователи не наблюдали увеличения потребления кислорода отдельными тканями при применении адреналина. Другие исследователи обнаружили увеличение потребления кислорода тканями под влиянием адреналина.
Аналогичные факты отметил Парий (1972 г.) в опытах на крысах. Им было установлено, что под влиянием адреналина увеличивается потребление кислорода тканями сердца, скелетной мышцы, печени и почек по сравнению с аналогичными результатами контрольной серии опытов соответственно на 25, 19, 19 и 21%. В этих же условиях не наблюдалось выраженных изменений со стороны потребления кислорода тканями аорты. Параллельно со сдвигами потребления кислорода отмечались и изменения выделения углекислого газа тканями исследуемых органов. При применении адреналина выделение CO2
увеличивалось в сердце на 52%, скелетной мышце – на 51%, печени на 54%, и почек – на 34%. Выделение CO2
аортой тоже возрастало, но эти изменения были статистически незначительными. При сопоставлении степени увеличения потребления кислорода и выделения CO2
нетрудно увидеть, что возрастание выделения CO2
было более интенсивным, чем активация потребления O2
. Это явление и определило сдвиг со стороны дыхательного коэффициента. Последний увеличивается в сердце, скелетной мышце и печени соответственно на 27, 18 и 52% по сравнению с таковым у контрольных животных.
Общеизвестны и другие метаболические сдвиги, обычно возникающие при применении адреналина, которые сводятся к активации фосфорилазы, накоплению глюкозы и молочной кислоты, усилению распада жиров и окислению жирных кислот, изменению обмена электролитов. Многими исследователями описана способность адреналина увеличивать содержание сахара в крови. Аналогичные результаты получил Парий в экспериментах на кроликах без наркоза. При внутривенном введении адреналина в дозе 0,01 мг/кг он наблюдал выраженную гиперлейкемию. На 30-й минуте после введения препарата содержание глюкозы в крови доходило до 142±3,6 мг %, что составляет 136% от исходного. Хотя в дальнейшем адреналиновая гиперлейкемия снималась, она оставалась статистически значимо повышенной до конца наблюдения.
Механизм действия адреналина на углеводный обмен сводится к усилению распада гликогена в печени и мышцах. Усиление гликолитических процессов является следствием активизации перехода неактивной фосфорилозы β в ее активную форму a. Эта активизация осуществляется опосредованно через циклический 3,5 аденозинмонофосфат, образование которого стимулирует адреналин. Таким образом, пусковым моментом в механизме действия адреналина на углеводный обмен является стимуляция образования 3,5-АМФ при наличии аденилатциклазы.
Как уже указывалось, под влиянием адреналина существенно возрастает концентрация свободных мирных кислот в крови, что вероятно, объясняется активацией липазы. Последняя способствует превращению триглицеридов в жировых тканях в глицерол и свободные жирные кислоты. Возможно, за счет повышения содержания свободных мерных кислот в крови жир деионизируется в мышцах и печени. Трудно установить, с возбуждением каких типов рецепторов связаны эти эффекты адреналина, так как блокада a и β-рецепторов предупреждает описанные превращения.
Большое значение в жизнедеятельности организма придают SH-группам.
Сульфидрильные группы, образуя разнообразные химические связи внутри белковой молекулы, имеют большое значение в создании и поддержании нативной структуры белка, благодаря чему определяются его функциональные свойства. Изучая в экспериментах на крысах влияние адреналина на содержание сульфидрильных групп в некоторых биологических субстратах, Арий установил, что после применения препарата общие сульфидрильные группы крови возрастают на 36%, причем это увеличение более выражено для белковых (на 40%), чем небелковых сульфидрильных группах (на 14%). В тканях головного мозга и сердца такие наблюдения изменения общих сульфидрильных групп в сторону их увеличения соответственно на 18 и 16%, однако статистически значимо возросло только содержание белковых сульфидрильных групп.
Полученные результаты увеличения количества сульфидрильных групп в крови под влиянием адреналина подтверждают широко распространенное мнение о роли этих групп в механизме мышечного сокращения и поддержания сосудистого тонуса.
Следует подчеркнуть, что между снижением содержания сульфидрильных групп сывороточных белков и снижением артериального давления отличается параллелизм. Этот факт дал авторам право предположить, что обнаруженные явления находятся в определенной взаимосвязи. Если при сниженном артериальном давлении ввести донатор сульфгидрильных групп – унитиол, - то наряду с возрастанием количества тиоловых групп в крови наблюдается и некоторое повышение артериального давления.
1.2. ФАРМАКОЛОГИЯ НОРАДРЕНАЛИНА.
Норадреналин, подобно адреналину, оказывает прямое действие на эффекторные клетки. Эти вещества отличаются друг от друга в основном по степени преимущественного влияния на a- или β-адренорецепторы. Норадреналин оказывает влияние главным образом на a-адренорецепторы и значительно слабее на β-адренорецепторы, исключая β1
-адренорецепторы сердца. В активности по отношению к a-адреналинорецепторам нарадреналин уступает адреналину и в большинстве случаев требуются сравнительно большие его дозы, чтобы получить эффект, соответствующий тому, который возникает после введения адреналина. На метаболические процессы норадреналин действует значительно слабее, чем адреналин.
Под влиянием норадреналина возрастает как систолическое, так и диасталическое давление. Пульсовое давление тоже несколько увеличивается. Минутный объем кровообращения не изменяется или даже может несколько уменьшаться. Последнее явление частично объясняют урежением сердечных сокращений, которое возникает благодаря компенсаторным рефлексам вагусного происхождения. Периферическое сопротивление в большинстве сосудистых областей возрастает. Кровоток через почки, мозг и печень уменьшается. Как правило, аналогичное явление наблюдается и в кровотоке через скелетные мышцы. Уменьшение церебрального кровотока сопровождается снижением потребления кислорода мозгом. Под влиянием норадреналина лизентериальные сосуды суживаются. Уменьшается также почечный кровоток. За счет расширения коронарных сосудов и повышения артериального давления увеличивается кровоток через коронарные сосуды. Благодаря тому, что норадреналин в большей степени влияет на a-адренорецепторы, в отличии от адреналина в малых дозах он не вызывает расширения сосудов и вторичного снижения артериального давления в первой фазе действия. На фоне применения веществ, блокирующих a-адренорецепторы, прессорные эффекты норадреналина подавляются, но не извращаются. Следует заметить, что необходимы большие дозы a-адренорецепторов, чтобы полностью предупредить вазоконстрикторное действие норадреналина. При использовании норадреналина вследствие посткапиллярной вазоконтрикции повышается давление в капиллярном русле и жидкая часть крови, не связанная с беками, проникает в гастроцелюлярное пространство. По этой причине объем циркулирующей крови может несколько уменьшаться. При экстракардиаграфических исследованиях регистрируется синусная брадикардия, связанная с рефлекторным повышением тонуса блуждающего нерва. В определенных условиях при назначении норадреналина может возникать желудочная тахикардия и фибрилляция.
Сила гипертензивного эффекта норадреналина меняется при патологических процессах, например, при шоке. Характерно, что в данном случае препарат был более эффективным на ранних стадиях этого патологического состояния. Следует подчеркнуть, что норадреналин усиливает централизацию кровообращения. В частности, норадреналин, улучшал мозговой кровоток и повышал коэффициент утилизации кислорода мозгом, ограничивает кровоток в других органах (конечности, почки), приводя тем самым к развитию гипоксии в них.
Выраженное вазоконстрикторное действие норадреналина способствует значительному увеличению возврата венозной крови и повышению давления в правом предсердии, легочной артерии и капиллярного давления в малом круге кровообращения. При заболеваниях сердца это может повлечь за собой отек легких. Сужение легочных сосудов в данном случае играет второстепенную роль. При попадании раствора норадреналина в подкожную клетчатку сосуды столь резко суживаются, что возникает тканевая апоксия с последующими некротическими явлениями. Следует отличить, что Путов, Митюнин и Селезнев, Бами и Грефнович наблюдали некроз клетчатки и кожи, окружающей вену, не связанный с паравенозным введением норадреналина. Проверив данное явление в эксперименте, Митюнин и Селезнев полагают, что длительные вливания норадреналина вызывают спазм мелких сосудов и ишемию стенки вен. В результате этого повышается проницаемость сосудов, и раствор адреномиметика, проникая в окружающие ткани, вызывает их ишемию, а затем и некроз. В экспериментах на собаках при длительной инфузии норадреналина обнаружили очаги массовых поражений, локализованные в сердце, желудке, диафрагме, кишках, мочевом и желчном пузыре.
После первоначального подъема артериальное давление постепенно снижается и достигает уровня ниже исходного. При длительном внутривенном введении норадреналина может развиваться своеобразное состояние, напоминающее геморрагический или травматический шок. Ученные установили, что у собак возникает сердечная недостаточность, если им в течении 30-60’ вливать раствор норадреналина со скоростью 2-4 мин/кг. Описанная сердечная недостаточность частично обусловлена кровоизменениями, распространенными очагами некроза и дегенерацией миофибралл миокарда. Такие повреждения сердечной мышцы могут наблюдаться и в клинике при ишемической болезни сердца. По-видимому, катехоламины играют существенную роль в генезе коронарной болезни. Эту гипотезу подтверждают такие факты, как улучшение течения коронарной болезни, наблюдаемое при истощении запасов катехоломинов и при применении β-адреноблокатов.
После неоднократного использования препарата может развиваться тахифилаксия, хотя не столь выраженная, как в случае эфедрина. Ряд авторов полагает, что норадреналин накапливается в избыточных количествах в адренергических синапсах заменяется неактивными или менее активными метаболитами. Другие исследователи считают, что развитию тахифилаксии способствует системный ацидоз, обусловленный апоксией, гипотензией и циркуляторным стазом. Однако, необходимо отметить, что восстановление нормального кислотно-щелочного баланса крови при ацидозе, вызванном норадреналином, мало влияет на развитие тахифилаксии к данному препарату. Более убедительна гипотеза, по которой предполагается, что рецепторы при длительном применении норадреналина в избытке насыщены медиатором, в результате чего возникает блокада и рефрактерность мышц сосудов.
При клиническом применении норадреналина может возникать гиперкалиемия и метаболический ацидоз с повышением содержания свободных аминокислот.
1.3. ФАРМАКОЛОГИЯ ЭФЕДРИНА
Эфедрин содержится в различных растениях, которые использовались в древней медицине около 5 тыс. лет тому назад. В современной медицине он был введен в практику в 1924г. Синтез алкалоида осуществлен в 1927г. Эфедрин стимулирует как a-, так и β-адренорецепторы. В механизме его действия существенную роль играет способность освобождать норадреналин. Таким образом, это препарат относится к непрямым адреномиметикам. Однако, не исключается и прямое влияние эфедрина на адренорецепторы. Возникающие при применении данного адреномиметика тахифилаксию объясняют истощением запасов катехоламинов. В связи с тем, что препарат возбуждает оба типа адренорецепторов, для него характерно стимулирующее действие на сердце и смешанный эффект на сосуды.
Предполагают, что сердечный компонент в механизме гипертензивного действия препарата имеет доминирующее значение. В связи с возбуждением адренорецепторов сердца возникает тахикардия, увеличение ударного и минутного объемов. Несмотря на выражены инотропный эффект, случаи аритмии при использовании эфедрина во время общего обезболивания встречаются относительно нечасто. Сердечный компонент в механизме гипертензивного действия эфедрина и прямой сосудосуживающий эффект препарата обнаружены как в экспериментах на животных, так и в наблюдениях на людях. Под влиянием эфедрина повышается систолическое давление и незначительно меняется диастолическое. В связи с этим возрастает пульсовое давление. Кровоток через почки и органы брюшной полости уменьшается. Мозговой кровоток и кровоток через скелетные мышцы увеличиваются.
Наблюдения на добровольцах показали, что при инфузии эфедрина со скоростью от 24 до 200 мг/кг/мин возникает вазоконстрикция, которая, по-видимому, осуществляется за счет освобождения катахоламинов из симпатических нервных окончаний. Во второй фазе наблюдается вазодилятация, которая очевидна связаны с прямым действием эфедрина на β-адренарецепторы. Необходимо указать, что истощение запасов катахоламинов под влиянием эфедрина подтвердилось не во всех наблюдениях. Например гипертензивный эффект эфедрина отмечали при использовании его у больных с дегенерацией отдельных вегетативных нервов. Эти факты свидетельствуют о том, что эфедрин помимо непрямого, обладает прямым действием на сосуды.
Имеются данные о том, что эфедрин в малых дозах усиливает эффекты катахоламинов с прямым действием на фосфорилазу «Q» в сердце, а в больших дозах препарат ослабляет этот процесс. В этом случае можно говорить о двух механизмах действия эфедрина. С одной стороны, он блокирует обратный транспорт катахоламинов, а с другой β-адренорецепторы.
В отличие от адреналина, эфедрин хорошо всасывается из кишечника, действует более длительно, но уступает по активности первому. Кроме того для него характерно выраженное центральное действие. Препарат в меньшей степени, чем адреналин повышает уровень сахара в крови. В опытах Парий (1970), выполненных на крысах без наркоза, было установлено, что при внутрибрюшинном введении эфедрина в дозе 5 мг/кг отмечается выраженное повышение потребления кислорода животными. По наблюдениям этого же автора препарат обладает довольно выраженным гипертермическим действием.
Как известно, при спинальной и эпидуральной анестезии часто назначаются гипертензивные препараты. При этих видах обезболивания снимается общее периферическое сопротивление сосудов, значительно увеличивается объем крови в венах, снижается минутный объем сердца, а также сила и частота сердечных сокращений. Применяемый в этих условиях эфедрин можно расценивать как физиологический антогонист. Однако не всегда удается с помощь данного препарата достичь удовлетворительного прессорного эффекта. Кроме того, тахифелаксия ограничивает возможность повторных инъекций эфедрина.
Глава 2. МЕТОДЫ АНАЛИЗА
2.1. ПЛОСКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
К плоскостным видам хромотографии относят бумажную (БХ) и тонкослойную (ТСХ). Эти два вида жидкостной хромотографии просты по технике выполнения, экспрессны, не требуют дорогостоящего оборудования. Разделение этими методами может быть выполнено с использованием различных роматографических систем потому выделяют адсорбционную, распределительную, обращенно-фазавую и ионно-обменную БХ и ТСХ. ТСХ используют чаще чем БХ.
Бумажная и тонкослойная хромотографии сходны по технике выполнения анализа. В БХ в качестве носителя неподвижной фазы, например воды используют целлюлозное волокно бумаги, в методе ТСХ – различные сорбенты (оксид алюминия, силикогель, целлюлозу и др.), нанесенные на пластинку тонким слоем. В обоих методах используют храмотографические системы жидкость – твердый сорбент и жидкость – жидкость – твердый сорбент, причем в качестве неподвижной фазы используют различные растворители или их смеси, органические и неорганические кислоты. Хроматографическое разделение в плоскостных видах хроматографии, как и в колонке, обусловлено переносом компонентов подвижной фазы вдоль слоя неподвижной фазы с различными скоростями в соответствии с коэффициентами распределения разделяемых компонентов.
Разделяемые компоненты на пластинке или на полоске бумаги образуют отдельные зоны (пятна), положение которых на хроматограмме характеризуется величинами Rf
- относительной скоростью перемещения компонентов в тонком слое или по бумажной полоске. Экспериментально величину Rf
определяют как отношение расстояния Х, пройденного веществом к расстоянию L, пройденному растворителем от старта до линии фронта:
Величина Rf
зависит от природы носителя (бумага, активности и природа сорбента, толщина слоя сорбента), качества и природы растворителя, способа нанесения пробы, детектирования, т.е. от техники эксперимента, температуры, некоторых других факторов. В идеальном случае Rf
не зависит от концентрации определяемого вещества и присутствия других компонентов.
Получение и анализ плоскостных хроматограмм
на полоске хроматографической бумаге или на тонком слое сорбента проводят острым карандашом стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего края бумаги (пластинки). Пробу наносят микропипеткой на линию старта. Диаметр пятная не должен превышать 2-3 мм; чем меньше пятно, тем лучше разделение. В ТСХ используют восходящий способ получения хроматограмм. Для этого применяют стеклянные, металлические или пластмассовые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента (неподвижная фаза) обычно толщиной 100-300 мкм. Исследуемое вещество наносят микропипеткой на стартовую линию, как в БХ и помещают пластинку в камеру, содержащую растворители (подвижная фаза) для разделения компонентов.
Хроматографирование в БХ и ТСХ продолжают до тех пор, пока на растворитель не пройдет от линии старта ≈ 10 см. После этого хроматограмму вынимают из камеры и подсушивают на воздухе. Если образуются невидимые зоны хроматограммы проявляют.
КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
Если на хроматограмме образуются окрашенные зоны, то проводят визуальное наблюдение. Невидимые хроматограммы проявляют соответствующими реагентами, как правило групповыми. По характерной окраски образующихся цветных зон судят о составе анализируемой пробы.
Для обнаружения компонентов используют также метод основанный на измерении величины RF
для стандартного и исследуемого растворов в одной камере, на одинаковых полосках бумаги или на одной и той же полоске. После проявления общих хроматограмм определяют RF
иследуемого и стандартного растворов. Сопоставляя их, делают заключение о наличии в исследуемом растворе тех или иных компонентов.
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
Количественный анализ осуществляют непосредственно на хроматограмме (на слое сорбента или на бумаге) или анализируемое вещество (пятно) вымывают из слоя сорбента (с бумажной полоски) после вырезания зоны, и полученный раствор анализируют каким-либо методом.
Непосредственно на хроматограммах количественный анализ можно осуществлять по размеру пятна (полуколичественное определение), спектрофотометрическим методом по спектрам поглощения (фотоденсиметрия) и по спектрам отражения, а также флуориметрическим, рентгенофлуорисцентным и радиометрическим методами. О
В настоящее время плоскостная хроматография , главным образом ТСХ, интенсивно развивается. Представляется важным развитие радиальной тонкослойной хроматографии: растворитель с регулируемой скоростью подается в центр пластины, заставляя зоны перемещаться от центра к периферии. Оказалось, что существенно ускоряется процесс разделения (1 – 4 мин) сложной смеси и для этого достаточно иметь пластины со слоем сорбента длиной 20 – 25 мм. За счет создания принудительного движения подвижной фазы с регулируемой скоростью уменьшения размера чачтиц и насыщения пространства над пластиной парами растворителя удалосб существенно ускорить процесс и повысить четкость разделения.
2.2. ИК и УФ спекторофотометрия
УФ – спектрофотометрические измерения проводят обычно в растворах. В качестве растворителя используется дистиллированная вода, кислоты, щелочи, спирты (метанол, этанол), некоторые другие органические растворители. Растворитель не должен поглощать в той области спектар, что и анализируемое вещество. Характер спектра (структура и положение полос поглощения) может изменяться в различных растворителях, а также при изменениях рН среды.
Метод УФ – спектрофотометрии включен в ГФ IХ, ГФ Х, а также в последние издания фармакопей почти всех стран для определения подлинности, чистоты и количественного определения лекарственных препаратов.
Изучение спектров поглощения химических веществ с разной структурой позволило установить, что основными факторами, обуславливающими поглощение света, являются наличие так называемых хромофоров, т. е. ненасыщенность (двойные и тройные связи), наличие карбонильной, карбоксильной, амидной, азо-, нитрозо-, нитро- и других функциональных групп. Каждая функциональная группа характеризуется поглощением в определенной области спектра. Однако имеется ряд факторов (присутствие нескольких хромофорных групп, влияние растворителя и др.), приводящих к смещению полос поглощения в сторону больших длин волн (батохромное смещение) или в сторону коротких длин волн (гипсохромное смещение). Кроме смещения может наблюдаться эффект увеличения (гиперхромный) или уменьшения (гипохромный) интенсивности поглощения.
В связи с этим для идентификации вещества по его УФ –спектру применяют обычно метод сравнения со спектром известного вещества, полученным в тех же условиях. Характеристикой спектра поглощения вещества является поглощение максимумов (минимумов) поглощения, а также интенсивность поглощения, что характеризуется величиной оптической плотности или удельного показателя поглощения.
Иногда для идентификации фармакопейных препаратов вместо абсолютных величин поглощения проводится отношение абсорбции при различных длинах волн. Инфракрасные (колебательные) спектры используются фармакопеями многих стран для идентификации лекарственных препаратов. ИК спектры большинства органических соединений в отличии от УФ спектров характеризуются наличием числа пиков поглощения.
Метод ИК –спектроскопии дает возможность получить наиболее полную информацию о строении и составе анализируемого вещества, позволяющую идентифицировать очень близкие по структуре соединения. В ГФ Х метод инфракрасной спектроскопии принят для идентификации лекарственных веществ с полифункциональными группами путем сравнения со спектрами стандартных образцов, снятыми в одиночных условиях.
2.3. ЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ
Люминесценция – это свечение атомов, молекул, ионов и других более сложных комплексов, возникающее в результате электронного перехода в этих частицах при их возвращении из возбужденного состояния в нормальное. Отсюда следует, что для возбуждения люминесценции необходимо проводить энергию извне, поскольку она теряется при излучении. Наиболее часто в аналитической практике используют фотолюминесценцию и хемилюминесценцию.
Люминесцентный анализ характеризуется высокой чувствительностью, это обусловлено тем, что люминесцентный метод относится к силовым, в котором выходной сигнал увеличивается с увеличением интенсивности источника излучения. Для большинства определяемых этим методом соединений пределы обнаружения не превышают 10-3
мкг/мл.
В идеальных условиях (высокие значения квантовых выходов люминесценции, молярных коэффициентов поглощения, отсутствие поправки на контрольный опыт и др.), даже применяя в качестве источника возбуждения лампы, удается достичь пределов обнаружения на уровне пикограммов в миллилитре. В модельных экспериментах с родамином 6 ис, сорбированном на отдельных частицах кремнезема диаметром 10 мкг, при использовании флуоресцентного микроскопа с лазером в качестве источника возбуждения удалось определить ≈ 8000 молекул красителя (≈ 6 * 10-18
г), сорбированных на индивидуальной частице. Высокая чувствительность определения, в ряде случаев большой диапазон определяемых содержаний – иногда до 4 порядков величин концентраций – при той же воспроизводимости результатов анализа, как и в молекулярной абсорбционной спектроскопии и предопределили развитие люминесцентного метода анализа.
Практическое применение
В неорганическом люминесцентном анализе наиболее распространены методы с использованием органических реагентов. Здесь есть свои особенности. Основная из них – более резко выраженная зависимость спектрально-люминесцентных свойств комплекса металла от природы и взаимного расположения электронных уровней лиганда и иона металла – комплексообразователя.
Наиболее распространенными люминесцентными реагентами являются 8-оксихинолин и его производные, оксиазо- и оксиазометиновые соединения, полиоксифлавоны, родаминтовые красители.
8-оксихинолин является неспецефическим реагентом, образующим флуорисцирующие хелаты более чем с 25 элементами, в том числе с Li, Ca, Mg, Ba, Al. Определению обычно предшествует экстракция, с помощью которой достигается требуемая селективность, поскольку спектры возбуждения флуоресценции и флуоресценции 8-оксихинолинатов практически не отличаются.
Другими большими группами флуоресцентных реагентов являются оксиазо- и оксиазолитивные соединеня (основания Шиффа). Исходные соединения этих классов – соответственно 2,2-диоксиазобензол и салицилиден-2-аминофенол. Их многочисленные производные широко применяют для определения Al, Ga, Mg и других элементов, образующие неокрашенные комплексы.
Полиоксифлавоны являются производными 2-фенил-1,4-бензопирозона. Они часто встречаются в природе в составе растительных компонентов. К соединениям этой группы относятся флавонол, 3-оксифлавон, морин, квертецин. Их применяют для определения Zn, Th, Al в сильнокислых растворах и Ве в щелочах.
Высокочувствительными и селективными флуориметрическими реагентами являются родаминовые красители. Их использование в неорганическом анализе основано на большей растворимости в органической фазе (чаще всего это бензол) ионных асоциатов катионов красителей с крупными анионами (в состав которых входит определяемый компонент) по сравнению с растворимостью простых солей реагента. Родаминовые красители применяют для определения Au, Ga, Hg, B и других элементов после переведения их в галогенидные ацидокомплексы.
Люминесцентное определение органических соединений основано главным образом на: а) прямых методах анализа по флуорисценции, с использованием различий в условиях возбуждения излучения и излучения определяемого соединения и сопутствующих компонентов; б) эффекте Шпольского; в) измерении фосфоресценции при комнатной температуре.
Эффект Шпольского – возникновение квазилинейчатых (комплексов) спектров люминесценции и поглощения сплощных органических молекул в специально подобранных растворителях, размеры молекул которых примерно совпадают с размерами молекул люминофора (чаще всего это Н-парафины) при низких температурах (жидкий азот или жидкий гелий). В таких условиях исследуемые молекулы изолированы друг от друга и местно закреплены в растворителе. Вследствие этого их электронно-колебательные спектры испускания и поглощения состоят не из широких полос, а из серии узких спектральных линий, напоминающих атомные спектры (из называют квазилинейчатыми спектрами) и обладают ярко выраженной индивидуальностью. Такие спектры наиболее характерны для полициклических ароматических углеводородов.
Методы анализа, основанные на эффекте Шпольского, позволяют определять одновременно несколько индивидуальных соединений (главным образом полициклических ароматических углеводородов) в их смеси с абсолютным пределом обнаружения до 10-11
г.
Квазилинейчатые спектры удается получить для ограниченного числа органических соединений. Для большинства же спектры излучения обладают слабо выраженной структурой. Получить более характеристичные спектры можно, используя синхронное сканирование. Это специфическая особенность метода молекулярной люминесцентной спектроскопии. При одновременном сканировании монохроматов возбуждение излучения и излучение с некоторым постоянным сдвигом ∆П в спектре синхронной люминесценции гипотетического соединения сигнал появится только при одновременном совпадении поглощения по длинам волн монохроматора возбуждения излучения с максимумом полосы спектра возбуждения и положения монохроматора люминесценции – с максимумом полосы спектра люминесценции.
Современная техника обработки информации позволяет получать трехмерные спектры. С использованием фотоприемников - видиконов можно измерить один такой спектр за время меньше 20 мс. Трехмерный спектр люминесценции легко может быть преобразован в двухмерный. Двухмерный спектр возбуждения люминесценции представляет собой набор горизонтальных сечений соответствующего трехмерного спектра. Двухмерные спектры напоминают отпечатки пальцев (их так часто называют), они индивидуальны для каждого соединения, их используют для быстрой идентификации органических соединений.
Еще одно интенсивно развивающееся направление в люминесцентном органическом анализе – фосфоресценция при комнатной температуре. Появление фосфоресценции при комнатной температуре связано с уменьшением скорости тушения кислородом триплетных состояний молекул сорбированных органических соединений. Это уменьшение обусловлено снижением подвижности молекул вследствие образования водородных или более прочных связей сорбат – сорбент.
2.4. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Определение активности адреналина основано на его способности вызывать повышенное артериальное давление у кроликов.
Стандартный препарат
. Стандартным препаратом при испытании адреналина является синтетический кристаллический адреналин, сохраняемый в запаянных ампулах оранжевого стекла в защищенном от света месте. Вскрытые ампулы должны храниться в вакуум-эксикаторе над пятиокисью фосфора.
Описание метода
. Для опытов берут здоровых кроликов обоего пола, весом 2,5 – 3 кг. Опыт проводят под уретановым (1г на 1 кг веса животного) или эфирным наркозом.
У кроликов на одной стороне отпрепаровывают яремную вену, а на противоположной стороне шеи - сонную артерию. Артерию соединяют с ртутным манометром при помощи каучуковой трубки, наполненной противосвертывающим раствором. Введение препаратов производят в яремную вену через вставленную в нее канюлю или при помощи очень тонкой иглы. За 15 минут до начала испытания кролику вводят внутривенно 1 мл 0,5% раствора атропина сульфата. Введение отдельных доз раствора адреналина производят с постоянной скоростью (1 мл в 5 сек). Каждое новое введение производят через 5 мин, считая с момента возвращения к норме кривой кровяного давления после предыдущего введения. Общий объем вводимой дозы не должен превышать 1 мл. Измерение высоты подъема производят от истинной абсциссы.
Целью опыта является определение доз, вызывающих подъем кровяного давления на одну и ту же высоту при введении испытуемого и стандартного растворов.
Испытание 0,1% раствора адреналина
. Препарат разводят 0,9% раствором хлорида натрия в соотношении 1 :50 для получения раствора 1 : 50000.
Стандартный препарат растворяют в 0,1 н растворе соляной кислоты в отношении 1 : 100. Полученный раствор доводят до концентрации 1 : 1000. Путем дальнейшего разведения этого раствора в 50 раз 0,9% раствором хлорида натрия достигают нужной для опыта концентрации 1 : 50000.
Определив сначала дозу раствора стандартного препарата, способную вызвать субмаксимальный для данного животного подъем кровяного давления, подбирают дозу исследуемого раствора, способную дать то же действие. Подыскав соответствующие дозы повторным введением растворов исследуемого и стандартного препаратов адреналина, убеждаются в одинаковой силе действия найденных доз растворов.
Зная содержание стандартного препарата в найденной дозе стандартного раствора, вычисляют содержание адреналина в исходном растворе испытуемого образца.
Для каждого испытания требуются средние данные, полученные при опытах не менее чем на 3-х кроликах.
Глава 3. ФАРМАКОПЕЙНЫЕ ПРЕПАРАТЫ
3.1.
Solutio Adrenalini hydrochloride 0,1%
Состав: Адреналина........................................ 1 г
Натрия хлорида................................. 8 г
Хлоробутанолгидрата....................... 5 г
Натрия метабисульфата.................... 1 г
Раствора соляной кислоты................ 0,01 н до 1 л
Раствор фильтруют, разливают в асептических условиях в ампулы нейтрального оранжевого стекла по 1 мл (раствор для инъекций) или в герметически закрытые флаконы того же стекла емкостью 10 мл, заполняя их доверху.
Описание
. Бесцветный прозрачный раствор.
Подлинность
.
· 1 мо препарата смешивают с 4 мл воды и прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; тотчас же появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления 1 капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное и затем в коричнево-красное.
· К 1 мл препарата прибавляют 2 мл 1% раствора йодата калия, 1 мл разведенной фосфорной кислоты и смесь нагревают в течение 1 минуты при 60°С; появляется стойкое, интенсивное красно-фиолетовое окрашивание.
· К 1 мл препарата прибавляют 5 мл буферного раствора (рН = 3,6) и 2 мл 0,1 н. раствора йода, оставляют на 5 мин, после чего смешивают с 3 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия. Рствор сохраняет темно-красное окрашивание (отличие от НА)
рН
3,0 – 3,5
Тяжелые металлы
10 мл препарата не должны содержать тяжелые металлы.
Хранение
. Список Б. В прохладном, защищенном от света месте.
Высшая разовая доза под кожу 1 мл
Высшая суточная доза под кожу 5 мл
Примечание. Для инъекций применяют раствор адреналина гидрохлорида 0,1% в ампулах (Solutio Adrenalini hydrochloridi 0,1% pro injektionibus)
3.2.
Noradrenalini hydrotartas. Норадреналина гидротартрат
Описание
. Белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса. Легко изменяется под действием света и кислорода воздуха.
Растворимость
. Легко растворим в воде, мало растворим в спирте, практически нерастворим в эфире и хлороформе.
Подлинность.
· 5 мл препарата растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления одной капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное, а затем в оранжево-красное.
· 1 мл 0,1% раствора препарата разводят гидротартратным буферным раствором с рН = 3,56 до объема 10 мл и прибавляют 2 мл 0,1 н раствора тиосульфата натрия. Раствор должен быть бесцветным или слабо-розовым (отличие от адреналина, вызывающего интенсивное красное окрашивание). Повторяют определение с 10 мл буферного раствора с рН = 6,5; образуется красно-фиолетовое окрашивание.
Раствор препарата (1 : 100) дает желтый осадок при прибавлении 0,5 мл раствора едкого натра.
Температура плавления
100 - 106° (плав мутный, препарат предварительно не высушивают).
Удельное вращение
от -10° до -12° в пересчете на сухое вещество (2% водный раствор).
Удельный показатель поглощения
. Е1%
1 см
при длине волны 279 нм от 769084 (0,005% водный раствор)
Кислотность
рН = 3,5 – 5,0 (1% водный раствор)
Вода
0,05 г препарата (точная навеска) титруют реактивом К.Фишера. Содержание воды должно быть 4,5 – 6,0%.
Сульфатная зола
из 0,2 г препарата должна быть невесомой.
Хранение
. Список Б. В запаянных ампулах или в хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света.
3.3.
Solutio Noradrenolini hydrotartratis 0,2% pro injektionibus. Раствор норадреналина гидротартрата 0,2% для инъекций
Состав: Норадреналина гидротартрата ................ 1 г
Натрия метабисульфита.......................... 1 г
Натрия хлорида....................................... 8 г
Воды для инъекций.................................. до 1 л
Раствор фильтруют, разливают в ампулы нейтрального оранжевого стекла по 1 мл и стерилизуют текучим паром при 100° в течение 15 мин.
Описание.
Бесцветная прозрачная жидкость
Подлинность.
Препарат дает первую и вторую реакцию подлинности, указанные для «Noradrenalini hydrotartas».
рН
= 3,0 – 4,5
Хранение.
Список Б. В прохладном защищенном от света месте.
3.4.
Ephedrine hydrochloridum Эфедрина гидрохлорид
Описание.
Бесцветные игольчатые кристаллы или белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса.
Растворимость
. Легко растворим в воде, растворим в 95% спирте, практически нерастворим в эфире.
Подлинность
· 0,01 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синее окрашивание. При взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира, эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, водный слой сохраняет синее окрашивание.
· 0,05 г препарата растворяют в 1 мл воды, прабавляют кристаллик феррицианида калия и нагревают до кипения; появляется запах бензальдегида.
· 0,01 г препарата дает с 0,5 мл разведенной азотной кислоты и 0,5 мл раствора нитрата серебра, образуется белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.
Температура плавления
216 - 220°
Удельное вращение
от -33° до 36° (5% водный раствор).
Кислотность
0,2 г препарата растворяют в 5 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды, прибавляют 1 каплю раствора метилового красного; появившееся красное окрашивание должно переходить в желтое от прибавления не более 0,15 мл 0,05Н раствора едкого натра.
Соли аммония
0,3 г препарата помещают в пробирку, приливают 2 мл воды и 1 мл раствора натра. В верхнюю часть пробирки вкладывают тонким слоем небольшое количество ваты. Сверху пробирки помещают смоченную водой красную лакмусовую бумагу. Пробирку помещают на пять минут в водяную баню с t = 0,5°. Не должен выделяться аммиак, который определяют по запаху и посинению красной лакмусовой бумаги.
Сульфаты
. Раствор 0,2 г препарата в 10 мл Н2
О должен выдерживать испытания на сульфаты (не более 0,05% в препарате).
Органические примеси
. Раствор 0,15 г препарата в 5 мл концентрированной серной кислоты должен быть бесцветным.
Хранение
. Список Б. Вхорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света.
Высшая разовая доза внутрь и под кожу 0,05 г.
Высшая суточная доза внутрь и под кожу 0,15 г.
3.5.
Solutio Eppedrini hydrochloridi 5% pro injektionibus Раствор эфедрина гидрохлорида 5% для инъекций
Состав: Эфедрина гидрохлорида......................... 50 г
Воды для инъекций.................................. до 1 л
Раствор фильтруют, разливают в ампулы нейтрального стекла по 1 мл и стерилизуют текучим паром при 100° в течение 30 мин.
Описание.
Прозрачная бесцветная жидкость.
Подлинность.
1 мл препарата разводят водой до 5 мл. Полученный раствор дает реакции подлинности, указанные для «Ephedrini hydrochloridum».
рН
= 4,5 – 7,0
Хранение.
Список Б. В защищенном от света месте.
Высшая разовая доза внутрь и под кожу 0,05 г
Высшая суточная доза внутрь и под кожу 0,15 г.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ
1.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА
1.
Реакция с хлоридом окисного железа
Адреналина гидрохлорид при добавлении FeCl3
окрашивается в изумрудно-зеленый цвет, переходящий от прибавления одной капли раствора аммиака в вишнево-красный, а затем в оранжево-красный.
2.
Реакция азосочетания
Адреналин, как соединение, содержащее фенольную группу, обладает способностью сочетаться с солями диазония. В качестве диазореактивов применяют обычно диазотированную сульфаниловую кислоту. При взаимодействии диазобензосульфокислоты с фенолами в щелочной среде образуются азокрасители; сочетание протекает в пара- или орто- положении к гидроксильной группе.
Выполнение реакции : 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в воде, прибавляем 5 – 6 капель диазореактива и через 3 – 5 мин – 2 – 3 капли раствора едкого натра; при этом возникает темно-красное окрашивание.
3.
Реакция с фосфорномолибденовой кислотой
Фосфорномолибденовая кислота в кислом или нейтральном растворе не окисляет слабые восстановители. В щелочной среде окислительная способность фосфорномолибденовой кислоты значительно повышается, в результате чего происходит окисление многих соединений, в молекуле которых содержится фенольный гидроксил; фосфоромолибдат при этом восстанавливается до так называемой молибденовой сини, как следствие этого появляется синее или зеленое окрашивание.
Выполнение реакции: 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в 1 мл воды и прибавляем 5 – 6 капель 10% раствора фосфорномолибденовой кислоты; адреналина гидрохлорид 0,1% приобретает зеленое окрашивание; после прибавления раствора аммиака появляется интенсивное темно-фиолетовое окрашивание.
4.
Реакция окисления.
Препараты, содержащие в молекуле фенольный гидроксил окисляются раствором йодата калия в кислой среде, образуя окрашенные комплексы.
Выполнение реакции: к 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида прибавляют 1 мл воды, по 5 капель раствора фосфорной кислоты и 1% раствора йодата калия и нагреваем на водяной бане.
5.
Тонкослойная хроматография (ТСХ)
На стеклянную пластинку наносим силикагель, гранулы которого предварительно измельчаем на шаровой мельнице, просеиваем через сито с размером отверстий 0,1 мм, обрабатываем концентрированной соляной кислотой, отмываем до нейтральной реакции дистиллированной водой и сушим на воздухе. Затем на тонкий слой силикагеля наносим каплю адреналина гидрохлорида 0,1%, помещаем в камеру с 70% этиловым спиртом, закрываем крышкой. Затем рассчитываем значение величины Rf
, который должен быть равен 0,13, что свидетельствует о подлинности препарата.
6.
Спектр поглощения.
0,005% раствор в 0,01 н растворе соляной кислоты, адреналина гидротартрата имеет максимум поглащения при длине волны 279 нм.
1.2. АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА
1.
Реакция с нингидрином.
0,005 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляем 1 к4аплю 0,1 н раствора едкого натра, несколько капель 0,25% раствора нингидрина и кипятим смесь 1-2 мин; появляется желтое окрашивание.
2.
Реакция с сульфитам меди в щелочной среде.
0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синевато-зеленое окрашивание.
3.
Тонкослойная хроматография (ТСХ).
Как и в случае адреналина в качестве сорбента используем тонкий слой силикагеля в виде порошка, либо в виде водной суспензии; в качестве растворителя также используем 70% этиловый спирт. Коэффициент подвижности Rf
равен 0,12.
4.
Спектр поглощения.
Определяем на спектрометрах. Анализируемый раствор помещается в специальную кювету (ультрафиолетовая спектроскопия), источник света подается в устройство монохроматора, а оттуда свет попадает в кюветное отделение, после того как раствор поглощает свет, спек р определяется индикатором. Максимум поглощения 0,005% водного раствора норадреналина гидротартрата равен 279 нм.
5.
Спектр флюоресценции.
Флюресценция норадреналина вызывается облучением коротковолновым ультрафиолетовым светом. Так, норадреналина гидротартрат флуоресцирует в ультрафиолетовом свете желто-зеленым светом. Максимум флуоресценции норадреналина гидротартрата составляет 505 нм.
1.3. АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА
1.
Реакция образования окрашенных комплексов меди:
0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра. Появляется синее окрашивание, при взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, что служит реакцией отличия эфедрина от остальных препаратов этой группы, у которых эфирный слой остается бесцветным.
Эфедрин, кроме того. дает следующую реакцию:
0,01 г препарата в 1 мл воды добавляем 8-10 капель раствора феррицианида калия и 2-3 капли раствора едкого натра; при нагревании ощущается запах бензальдегида.
2.
Тонкослойная хроматография (ТСХ).
На стеклянную пластинку размером 9x12 см наносим слой окиси алюминия толщиной 0,6 мм.
В качестве растворителей используем смесь бензол-метанол (9:1), помещаем в этот раствор пластинку и рассчитываем потом Rf
, который должен быть 0,15.
3.
Хроматография на бумаге (БХ).
В данном случае неподвижной фазой служит вода, адсорбированная на бумаге. В качестве растворителя используем: 1) месь циклогексан-диэтиламин в соотношении 9:1, при этом Rp = 0,47; 2) смесь петролийный эфир-этиламин (9:1), Rf
= 0,26; 3) смесь циклогексан-хлороформ-диэтиламин (7:2:1), Rf
= 0,76.
4.
Флюоресценция.
К 1-2 мг эфедрина гидрохлорида в сухой пробирке прибавляем 7-8 капель реактива Марки (раствор фармальдегида в H2
SO4
) и 5 – 7 капель воды. Наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.
Глава 2. КОЛИЧЕСТВЕНЫЙ АНАЛИЗ
2.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА
Около 0,15 г тонкоизмельченного и высушенного препарата (точная навеска) растворяем в 20 мл ледяной уксусной кислоты, слегка нагревая до 40°С в случае медленного растворения и титруем 0,1 н раствора хлорной кислоты до голубовато-зеленой окраски. Индикатор – метиловый фиолетовый.
1 мг 0,1 н раствора хлорной кислоты соответствует 0,03333 г адреналина.
При проведении титрования было израсходовано 8 мл хлорной к4ислоты. Таким образом, содержание адреналина в исходном препарате составляет 0,26664.
2.2. АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА
5 мл препарата разводим водой в мерной колбе до 100 мл. К 10 мл полученного раствора прибавляем 0,2 мл железо-цитратного реактива и 1 мл аминоуксусной буферной смеси, оставляем на 10 минут и измеряем оптическую плотность окрашенного раствора на фотонитроколориметре при длине волны 530 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
Содержание норадреналина в 1 мл препарата составляет 0,0019 г.
2.3. АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА
0,1 г препарата (точная навеска) растворяем при нагревании в 10 мл ледяной уксусной кислоты, после охлаждения прибавляем 5 мл предварительно нейтрализованного раствора ацетата окисной ртути и титруем 0,1 н раствором хлорной кислоты до голубого окрашивания. Индикатор – кристаллический фиолетовый.
1 мл 0,1 н раствора хлорной кислоты соответствует 0,02017 эфедрина.
На титрование пошло 10 мл хлорной кислоты, содержание эфедрина в препарате составляет 0,2017.
ВЫВОДЫ
:
1. Нами были проведены наиболее широко используемые методы количественного и качественного анализа производных арилалкиламинов. При проведении ТСХ для адреналина был определен коэффициент подвижности Rf
, равный 0,13, что соответствует норме т.е. наш исследуемый препарат отвечает требованиям ГФ по показателю «Подлинность».
2. Во время ультрафиолетового спектрафотометрического анализа лекарственных средств аралалкиламинов нами были зафиксированы максимумы поглощения длин волн в радиусе 279 нм.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
:
1. Э.М. Аксенова. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. / М.: «Медицина», 1987г.
2. Р.Н. Аляутдин. Фармакология. / М.: 2004 г.
3. А.П. Арзамасцев. Фармакопейный анализ. / М.: «Медицина», 1971г.
4. М.П. Максютина. Методы идентификации лекарственных препаратов. / Киев «Здоровье», 1978г.
5. Г.А. Мелентьева. Фармацевтическая химия, Т. 2 / М.: «Медицина», 1976г.
6. Е.А. Мухин. Фармакология гипертензивных средств / Кишинев, 1974г.
7. Б.А. Райсберг. Руководство по количественному анализу лекарственных препаратов / М.: «Медицина», 1978г.
8. М.Ф. Старцев. Идентификация лекарственных препаратов / М.: «Медицина», 1981г.
9. А.М. Хамцкий. Фармацевтическая химия / Ленинград. «Медицина», 1966г.
10. Д.А Харкевич. Фармакология. / М.: «Медицина», 1980г.
11. ГФ IX / М.: «Медгиз», 1961г.